通常用作核酸酶和蛋白酶的抑制剂。它也可以用来消除重金属离子对酶的抑制作用。
除了钠盐外，还有各种盐，例如铵盐和铁，镁，钙，铜，锰，锌，钴和铝，这些盐有不同的用途。它也可以用来从人体中清除有害的放射性金属，它也是水的处理剂。它也是重要的指示剂，但用于滴定金属镍，铜等，并且必须与氨水一起用作指示剂。
由于大多数核酸酶和某些蛋白酶都需要Mg离子，因此它们通常被用作核酸酶和蛋白酶的抑制剂，它们还可以用于从抑制酶中去除重金属离子。
在800L的不锈钢缩合反应槽中，添加100kg的氯乙酸，100kg的冰和135kg的30％氢氧化钠溶液，并在搅拌下进一步添加18kg的83％至84％的乙二胺。在15°C孵育1小时后，每次以10 L的份量添加30％的氢氧化钠溶液。每次添加后，酚酞指示剂不是碱性的，然后添加下一批，最后反应物是碱性的。
在室温下保持12小时后，将其加热至90°C，加入活性炭，过滤，并用水洗涤滤渣，最后溶液的总体积约为600L。加入pH直至pH不为3，并沉淀出晶体。过滤并洗涤至无氯反应。干燥，得到EDTA64kg。产率为95％。它也可以在较高温度条件下进行。
例如，使用以下摩尔比：乙二胺:氯乙酸:氢氧化钠=1:4.8:4.8，反应温度为50℃，反应为6h，然后煮沸2h，反应产物用盐酸酸化。酸得到EDTA晶体，收率82％?90％。
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